Sun . 20 Aug 2020

Вектор (молекулалық биология)

Молекулалық клондау кезінде вектор дегеніміз - бөгде генетикалық затты жасушалық жолмен басқа жасушаға тасымалдауға арналған құрал ретінде пайдаланылатын ДНҚ молекуласы, онда оны көбейтуге және / немесе көрсетуге болады, мысалы, плазмид, космид, Ламбда фагтары Бөтен ДНҚ бар вектор деп аталатын рекомбинантты ДНҚ деп аталады. Векторлардың төрт негізгі түрі - бұл плазмидтер, вирустық векторлар, космидтер және жасанды хромосомалар. Олардың ішінде кең таралған векторлар плазмидтер болып табылады [1] Барлық жасалған векторларға ортақ репликацияның шығу тегі, көп клондау учаскесі және таңдалатын маркер <болып табылады. br> Вектордың өзі көбінесе ДНҚ тізбегі, ол трансгендерден және үлкен вектордан тұрады, олар вектордың «тірегі» қызметін атқарады. Генетикалық ақпаратты басқа ұяшыққа беретін вектордың мақсаты, әдетте, оқшаулау, көбейту немесе бөлу болып табылады. мақсатты ұяшыққа кірісті білдіру Барлық векторлар клондау үшін қолданылуы мүмкін, сондықтан векторларды клондау мүмкін, бірақ сонымен қатар клондау үшін арнайы жасалған векторлар да бар, ал басқаларында спектр жасалуы мүмкін Мақсатты ұяшықтағы трансгенді бейнелеу үшін арнайы жасалған транскрипция және ақуызды білдіретін Векторлар сияқты басқа мақсаттар үшін өрнектегі векторлар деп аталады және әдетте транскрипция векторлары деп аталатын қарапайым трансформаторлардың векторларын қоздыратын промоутер тізбегі бар Транскрипцияланады, бірақ аударылмайды: оларды мақсатты ұяшыққа көшіруге болады, бірақ білдірілмейді, өрнек векторларынан айырмашылығы транскрипция векторлары олардың кірістірулерін үлкейту үшін қолданылады. ДНҚ-мен манипуляция әдетте E coli векторларында өткізіледі, олардың құрамында қажетті элементтер бар. E coli-де техникалық қызмет көрсету Алайда, векторларда оларды басқа ағзада, мысалы ашытқы, өсімдік немесе сүтқоректілер жасушаларында ұстап тұруға мүмкіндік беретін элементтер болуы мүмкін, және бұл векторларды сатылым векторлары деп атайды. Мұндай векторларда бактериалды немесе вирустық элементтер болады, оларды басқаға ауыстыруға болады. - бактериалды қабылдаушы организм, алайда басқа векторлар интрагендік векторлар деп аталады Бөтен түрден кез-келген генетикалық материалдың берілуіне жол бермеу үшін [2]
Векторды мақсатты жасушаға енгізу әдетте бактериялық жасушалар үшін трансформация деп аталады, [3] эукариот жасушаларына трансфекция, [4] вирустық вектор жиі трансдукция деп аталады [5]
Мазмұны
1 сипаттамасы
11 Плазмидтер
12 Вирустық векторлар
13 Жасанды хромосомалар
2 Транскрипция - 3 Өрнек
31 Прокариот өрнек векторы
32 эукариот өрнегінің векторы
4 ерекшеліктері
5 сонымен қатар қара: 6 сілтемелер
7 қосымша оқу
8 сыртқы сілтемелер
сипаттамалары
плазмидалар
негізгі мақала : Плазмидтік вектор
Плазмидалар - екі тармақты және жалпы ДНҚ тізбегі, олар негізгі жасушаның репликация техникасын қолдана отырып репликация жасай алады [6] Плазмид векторлары минималистік түрде плазмиданың жартылай тәуелсіз репликациясына мүмкіндік беретін репликациядан тұрады. негізгі плазмидтер көптеген бактерияларда кездеседі, мысалы, Эсерихияда с оли, бірақ сонымен бірге бірнеше эукариоттарда кездеседі, мысалы Saccharomyces cerevisiae сияқты ашытқыларда [7] Бактериалды плазмидтер конъюгативті / ауыспалы және конъюгативті емес болуы мүмкін:
конъюгативті - ДНҚ-ны конъюгация арқылы дамиды және сондықтан тез таралады. популяцияның бактериялық жасушалары; мысалы, F плазмиді, көптеген R және кейбір колаз плазмидалары - үйлесімсіз - ДНҚ-ны конъюгация арқылы жасамаңыз, мысалы, көптеген R және кол плазмидалары ... pBR322 плазмиді клондау векторы ретінде кеңінен қолданылатын алғашқы плазмидалардың бірі
Арнайы жасалған ерекшеліктері бар плазмидтер клондау үшін зертханада жиі қолданылады. Бұл плазмид әдетте конъюгациялық емес, бірақ көптеген басқа қасиеттерге ие, атап айтқанда «бірнеше клондау учаскесі» бар, онда бірнеше шектеуші ферментті тазарту алаңдары трансгенді кірістіруге мүмкіндік береді. Плазмидтер бар бактериялар бірнеше сағат ішінде бактериялардың ішінде миллиондаған вектордың векторын тудыруы мүмкін, ал күшейтілген векторларды бактериялардан әрі қарай айқындау үшін шығарып алуға болады Плазмидтер арнайы транскрипция векторлары ретінде пайдаланылуы мүмкін және мұндай плазмидтер ақуызды білдіру үшін маңызды тізбекті болмауы мүмкін Белокты өрнектеу үшін қолданылатын плазмидтер, өрнек векторлары деп аталады, ақуызды аударуға арналған элементтер, мысалы рибосома байланыстыратын орын, басталу және тоқтату кодондары - Вирустық векторлар
Негізгі мақала: Вирустық вектор - Вирустық векторлар - бұл көбінесе генетикалық-басқарылатын вирустар, өзгертілген вирустық ДНҚ немесе РНҚ, вируссыз, бірақ вирусты қоздырғыштар мен трансгендерді де қамтиды. Трансгенді вирустық промотор арқылы аударуға мүмкіндік беру Алайда, вирустық векторларда жиі жұқпалы тізбектер болмағандықтан, олар көмекші вирустарды немесе масштабты трансфекция үшін орау сызықтарын қажет етеді Вирустық векторлар көбінесе хост геномына тұрақты қосылуға арналған және осылайша, трансгенді енгізгеннен кейін хост геномында нақты генетикалық маркерлерді қалдырыңыз. Мысалы, ретровирустар анықталатын енгізуден кейін тән ретровирустық интегралдау үлгісін қалдырады және вирустық вектор хост хост геномына енгенін көрсетеді
Жасанды хромосомалар
Негізгі мақала : Жасанды хромосоманы бөлу
Жасанды хромосомалар - хромосомалар ашытқы жасанды хромосомалары YAC, бактериялық жасанды хромосомалар BAC немесе адамның жасанды хромосомалары HAC жасанды хромосома ДНҚ фрагменттерін басқа векторларға қарағанда әлдеқайда үлкен көтереді [8] Жасанды хромосоманың қажеттіліктеріне репликацияның шығу тегі, центромера және теломердің соңғы тізбегі кіреді [9]. Транскрипция - клондалған геннің транскрипциясы - геннің экспрессиясы қажет болған кезде вектордың қажетті компоненті: бір ген. мРНҚ-ның бірнеше көшірмесін жасау үшін транскрипция арқылы күшейтілуі мүмкін, шаблонды аудару арқылы шығаруға болатын шаблон [10] mRNAның көп саны протеиннің көбірек мөлшерін білдіреді және mRNA-ның қанша көшірмесі промоутерге байланысты болады векторда қолданылады [11] өрнек конституциялық болуы мүмкін, яғни ақуыз үнемі фонда пайда болады немесе ол индукцияланбауы мүмкін. ақуыз белгілі бір жағдайда ғана көрсетіледі, мысалы химиялық индуктор қосылған кезде. Бұл екі түрлі өрнек промотор мен оператордың түріне байланысты болады. Вирустық промоутерлер көбінесе плазмидалар мен вирустық векторларда конституциялық көрініс үшін қолданылады. олар әдетте көптеген жасуша сызықтары мен түрлерінде тұрақты транскрипцияны мәжбүрлейді [12] Индуктивті өрнек индукция жағдайларына жауап беретін промоутерлерге байланысты: мысалы, сүт бездерінің ісік вирусын қоздырғышы тек дексаметазон қолданғаннан кейін ғана транскрипцияны бастайды және Дрозофилия жылу соққысы промоторы жоғары температурадан кейін
Кейбір векторлар тек транскрипцияға арналған, мысалы in vitro mRNA өндірісі үшін Бұл векторлар транскрипция векторлары деп аталады. Олар полиадениляция және тоқтату үшін қажетті тізбекті алуы мүмкін, сондықтан ақуызды өндіру үшін пайдаланылмауы мүмкін
Өрнек Негізгі мақала: Өрнек векторы - Өрнек векторлары шығарады вектор кірісін транскрипциялау арқылы ақуыздар алынған мРНҚ-ны аудару арқылы жүзеге асырылады, сондықтан олар қарапайым транскрипцияға арналған векторлардан гөрі көп компоненттерді қажет етеді Әр түрлі хост ағзасындағы өрнек әртүрлі элементтерді қажет етеді, бірақ олар ұқсас талаптарды бөліседі, мысалы, бастамашылықты көтермелеуші. транскрипция, аударманы бастаушы рибосомалық байланыстыратын торап және тоқтату сигналдары
Прокариоттардың өрнектеу векторы
Промоутер - жиі қолданылатын индуктивті промоутерлер лак оперонынан және T7 промоутерінен алынған промоутерлер болып табылады. Trp промоутері мен Tac-Promoter қолданылады. , Trp және Lac Operon промоутерлерінің гибриді
Ribosome байланыстыратын сайт - RBS - промоутерді іздейді және қызығушылық ақуызының тиімді аудармасын қолдайды
аударма бастамашылық сайты - RBS-де қамтылған Shine-Dalgarno тізбегі, AUG бастау кодонынан жоғары 8 базалық жұп - Эукариот өрнегінің векторы - Эукариот өрнегінің векторы ors үшін келесідей кодты қажет ететін тізбекті қажет етеді: Полядениляция құйрығы: мРНҚ-ны экзонуклеазадан қорғайтын және транскрипциялық және трансляциялық тоқтатуды қамтамасыз ететін транскриптелген алдын-ала mRNA соңында полиадениляция құйрығын жасайды: mRNA өндірісін тұрақтандырады
UTR минималды ұзындығы: UTR Транскрипцияға немесе аударуға кедергі келтіретін нақты сипаттамалары бар, сондықтан ең қысқа UTR немесе мүлде жоқ, оңтайлы өрнектегі векторлар үшін кодталған: Kozak тізбегі: Векторлар mRNA-да Козак тізбегін кодтауға тиіс, ол аударуға рибосоманы жинайды. mRNA
ерекшеліктері
Қазіргі жасанды түрде жасалған векторлар барлық векторларда кездесетін маңызды компоненттерден тұрады және кейбір векторларда ғана кездесетін басқа да қосымша функцияларды қамтуы мүмкін:
Репликацияның шығу тегі: Векторды шағылыстыру және қолдау үшін қажет Промоутер хост ұяшығында: Промоутерлер вектордың трансгендерін, сондай-ақ вектордағы басқа гендердің транскрипциясын жүргізу үшін қолданылады. Антибиотикке төзімділік гені Кейбір клондау векторларына клондалған кірістіру үшін промотор қажет емес, бірақ бұл клондалған өнімді білдіру үшін өрнектегі векторлардың маңызды компоненті болып табылады. Шетелдік ДНҚ-ны векторға лигатура арқылы енгізуге мүмкіндік береді
Генетикалық маркерлер: Вирустық векторларға арналған генетикалық маркерлер вектордың қабылдаушы геномдық ДНҚ-мен интеграцияланғандығын растауға мүмкіндік береді ... Антибиотикке төзімділік: Антибиотикке төзімді векторлар Антибиотиктерді таңдау арқылы антибиотиктері бар өсу ортасында векторды қабылдаған жасушалардың өмір сүруіне мүмкіндік береді
Эпитоп: Кейбір векторларда белгілі бір эпитоп үшін белгілі бір протеинге қосылуға болатын реттілік болуы мүмкін. мақсатты ақуыз
Репортер гені: Кейбір векторларда плазмидті анықтауға мүмкіндік беретін репортер гені болуы мүмкін кірістірілген ДНҚ тізбегі Мысал ретінде lacZ-α, β-галактозидазаның N-терминалды фрагменттеріне код беріледі, галактозаны сіңіретін фермент Бірнеше клондау орны lacZ-α-да орналасады, ал векторға сәтті бекітілген қоспа бұл функцияны бұзады. ген тізбегі, нәтижесінде белсенді емес β-галактозидазасы бар векторы бар жасушалар көк-ақ сұрыптау арқылы галактозаның аналогы бар галактозалық аналогы бар мультимедиа жасушалары арқылы анықталуы мүмкін, сондықтан act-галактозидазаны білдіретін, сондықтан кірістері болмайды көгілдір колониялар ретінде Ақ отарлар кірістірілген болуы мүмкін ретінде таңдалады. Басқа кең таралған репортерларға жасыл флуоресцентті ақуыз және люцифераза жатады. Мақсатты жүйелілік: Өрнек векторлары көрсетілген ақуызға бағыттайтын дайын протеиндегі мақсатты реттілік үшін кодтауды қамтуы мүмкін. жасушадағы белгілі бір органелл немесе бактериялардың периплазмалық кеңістігі сияқты белгілі бір орын
Ақуызды тазарту белгілері: Кейбір мысалдар Эспциондық векторларға ақуыздар немесе пептидтер тізбегі кіреді, бұл ақуызды оңай тазартуға мүмкіндік береді. Мысалға полихистидин-тег, глутатион-S-трансфераза және мальтоза байланыстыратын ақуыз. Осы белгілердің кейбіреуі мақсатты ақуыздың ерігіштігін арттыруға мүмкіндік береді. ақуыз тегіне біріктірілді, бірақ протеаздың бөліну учаскесі протеин мен тег арасындағы полипептидті байланыстырушы аймақта орналасқан, бұл тегті кейінірек алып тастауға мүмкіндік береді. Сондай-ақ, қараңыз: Plasmid
Вирустық вектор
Клондық вектор
Өрнек векторы - Гибридті вектор
Миницикл - Рекомбинантты ДНҚ
Жалаңаш ДНҚ - Векторлық эпидемиология, ауруды тарататын организм
Адамның жасанды хромосомалары
Ашытқы жасанды хромосомалары
Бактерия жасанды хромосомалар
Әдебиеттер: ^ Lodish H, Berk A, Zipursky SL, Matsudaira P, Baltimore D, Darnell J 2000 «Плазмидті векторлармен ДНҚ клондау» Молекулалық жасуша биологиясы 4-ші Нью-Йорк: WH Freeman
^ Acquaah G 16 тамыз 2012 ж. П принциптері генетика және асыл тұқымды Джон Вилли & amp; Sons Inc ISBN 978-1-118-31369-5
Джонстон С, Мартин В, Фичант Г, Полард П, Клавериялар JP Наурыз 2014 «Бактериялардың өзгеруі: бөлу, ортақ механизмдер және дивергентті бақылау» Табиғи шолу Микробиология 12 3: 181–96 doi: 101038 / nrmicro3199 PMID 24509783
^ «MeSH Browser» meshbnlmnihgov 2018-04-16
^ Hartl DL, Jones EW 1998 Генетика: қағидаттар мен талдау 4-ші шығарылым Садбери, Масса: Джонс және Бартлетт Баспагерлер ISBN 978-0-7637-0489-6 OCLC 45730915
^ дель Солар, Глория; Джиралдо, Рафаэль; Руис-Эчеварриа, Мария Хесус; Эспиноса, Мануэль; Диаз-Орежас, Рамон 1998 ж. Маусым, «Дөңгелек бактериалды плазмидалардың репликациясы және бақылауы» Микробиология және молекулалық биологияға шолу 62 2: 434–464 ISSN 1092-2172 PMC 98921 PMID 9618448
^ Браун TA 2010 «2-топ - Гендерді клондаудың векторлары. : Плазмидтер мен бактериофагтар «Гендерді клондау және ДНҚ талдауы: Кіріспе 6-ші шығарылым Wiley-Blackwell ISBN 978-1-4051-8173-0
^ Джулин, Дуглас 2014 Молекулалық өмір туралы ғылым Спрингер, Нью-Йорк, Нью-Йорк, 1-3 беттер : 101007 / 978-1-4614-6436-5_91-3
^ Мюррей, Эндрю; Состак, Джек қараша 1987 ж. «Жасанды хромосомалар» ғылыми американдық 257 5: 62–68
^ Соломон Э.П., Берг Л.Р., Мартин Д.В. 2005 Биология 8-ші Белмонт, Калифорния: Брукс / Коул Томсонды оқыту ISBN 978-0-495-31714 -2 OCLC 123008833
^ Дамдиндорж L, Карнан S, Ота А, Хоссейн Е, Кониши Y, Хосокава Ю, Кониши Н 2014-08-29 «Аденомен байланысты вирустық векторларда орналасқан құрушы промоторлардың салыстырмалы талдауы» PLOS One 9 8: e106472 doi: 101371 / jurnalpone0106472 PMC 4149579 PMID 25170953
^ Левин А, Майер М, Чусаинов Дж, Джейкобс Д, Аппел 2005 ж. Маусым «Вирустық промоутерлер эсеричий коли» енгізілген токсиндік гендердің экспрессиясын бастай алады «BMC Биотехнологиясы 5 : 19 doi: 101186 / 1472-6750-5-19 PMC 1181807 PMID 15967027
Әрі қарай оқу
Жануарлар клеткаларының Фрешни ИК мәдениеті: Хобокен, Нью-Джерси негізгі техникасы бойынша нұсқаулық: Джон Уайли & amp; Sons, Inc ISBN 978-0-471-45329-1 - Сыртқы сілтемелер - Ваксман ғалымдарының векторлармен таныстыруы - Гендердің клиникалық ауысуы үшін пайдаланылатын векторларды салыстыру - геннің көлігі бөлімі
Молекулалық және Жасушалық биология порталы


Vector (molecular biology)

Random Posts

B♭ (musical note)

B♭ (musical note)

B♭ B-flat; also called si bémol is the eleventh step of the Western chromatic scale starting from C ...
Fourth dimension in art

Fourth dimension in art

New possibilities opened up by the concept of four-dimensional space and difficulties involved in tr...
Holt Renfrew

Holt Renfrew

Holt, Renfrew & Co, Limited, commonly known as Holt Renfrew or Holt's,1 is a chain of high-end C...
Later Silla

Later Silla

Later Silla 668–935, Hangul: 후신라; Hanja: 後新羅; RR: Hushila, Korean pronunciation: ...